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使用 BioLegend 工具,找到最適合的流式細胞術 (Flow cytometry) 多色螢光抗體方案,可確認螢光抗體是否有顏色是否重疊,並且可以快速找到你所需的螢光抗體。 挑選多色螢光,流式細胞儀,流式細胞抗體,螢光抗體,Flow cytometry

挑選您的流式細胞術 (Flow cytometry) 多色螢光抗體方案

BioLegend 所提供的多色螢光選擇,突破了傳統流式細胞儀 (Flow cytometry) 的限制,同時可兼融光譜流式細胞儀的多色抗體。多色流式細胞儀平台通常都是使用兩種或者多種的一級螢光抗體,去鑑定單細胞上的多重抗原表現,通常多色流式細胞的組合目地,多是為了得到最佳的訊及可有效的觀察細胞群體,以下提供一些 流式細胞儀的工具,幫助您快速找到最合適的螢光抗體。

(1) 確認實驗室流式細胞儀的配製
在進行多色螢光抗體的配色時,必須先確認實驗室的流式細胞儀配製:
◆雷射光源的種類,如: 405 nm, 488 nm, 561 nm, 637 nm, 750 nm
◆螢光濾光片的種類 ,如: 450/50, 690/50, 585/42, 660/20
最終確認流式細胞儀可使用的相符合相對應螢光團。 如: 雷射光 : 405 nm / 濾光片 : 450/50 可搭配 Brilliant Violet 421™ 螢光團 

BioLegend 雷射光源及濾光片對應之螢光團表單

(2) 了解待測樣本的表現強弱,選擇適合的螢光團強度
若待測樣本在總樣本中的數量極少,或者是待測樣本本身標誌表現量低甚至不明,建議使用較亮的螢光團最為選擇,如: PE/PE-Cyanine 5; 反之,若待測樣本本身標誌物表現高,則可以使用亮度較低的螢光團,如: FITC/PerCP。

BioLegend 螢光強度工具表

推薦流式細胞術期刊 Cytometry Part A ,尋找合適的文獻,可做為螢光抗體的配色及流式細胞術試驗時之圈選參考。

(3) 使用 BioLegend 螢光光譜分析器,避免使用發射光譜重疊的螢光團
除了螢光亮度的選擇外,同時要避免同一支雷射光譜產生的螢光光譜重疊,若遇到螢光光譜重疊的狀況,就會導致實驗結果不準確,並造成判讀上的誤會。同時建議在多色螢光抗體染色上機前,都要進行螢光補償 (Fluorescence compensation) 的調整,才能夠獲得更準確的流式細胞術結果。

使用 BioLegend 螢光光譜分析器,確認螢光光譜是否重疊

(4) 尋找符合的螢光抗體
BioLegend 提供多色螢光抗體挑選工具! 使用此工具能夠快速的找到您多色螢光方案中,所需要的螢光團抗體。

簡易使用教學:

◆點選所選擇的螢光團及雷射

◆點選所選擇的物種

◆點選所選擇的標誌物

◆點選尋找產品

即可幫您配製好所有相對應螢光的產品,案 + 的選項後, 及可將您選擇的螢光抗體進入您的配色方案中。

點選可看影片教學~

(5) 評估待測樣本,選擇合適的緩衝溶劑
◆若待測樣本標誌物在胞內的話,通常會搭配固定劑以及通透性緩衝液體,BioLegend 提供 True-Nuclear™ Transcription Factor Buffer Set (cat.no 424401),此試劑可針對胞內轉錄分子染色而設計的緩衝液試劑組,可減少細胞表面螢光染色的干擾 (套組中包含細胞固定液及增強細胞通透性緩衝液)。BioLegend 同時提供一個 Fixation 資料庫,可以查看不同螢光抗體,固定前後的結果差異,讓您可以檢視此抗體是否適合進行固定。

◆若待測樣本染色完,並沒有要馬上進行上機,BioLegend 提供 Cyto-Last™ Buffer (cat.no 422501),專為保存即將進行胞內細胞激素染色的細胞所設計緩衝溶液,處理完畢的細胞可於4°C穩定保存為期兩週。

◆進行單細胞的多重抗原表現染色,免不了可能會使用到 tandom dye 的螢光團,而在螢光染色後,若過度固定樣本,可能會導致 tandom dye 螢光團上的鍵結螢光掉落,因此 BioLegend 提供 FluoroFix™ Buffer (cat.no 422101) ,為即用型緩衝液,用於免疫螢光染色後的細胞固定,可幫助穩定 tandom dye,避免產生過度固定後的螢光訊號改變。

◆若是樣本標誌物為胞內的磷酸化蛋白,BioLegend 提供 True-Phos™ Perm Buffer (cat.no 425401) ,可應用於胞內磷酸化蛋白(如p-STAT6, p-ERK) 和訊息傳遞分子(如Cyclin B1, pan-STAT3) 染色的緩衝液。

查看 BioLegend 推薦流式細胞術緩衝試劑

(6) 建立實驗對照組
進行多重螢光染色的試驗時,可能會有許多非特異性的訊號干擾,為了排除可能的干擾因素,提高準確試驗的準確性,必須建立相對的實驗對照組。

◆未染色細胞:避免樣本自體螢光干擾

◆細胞死活染色試劑: BioLegend 提供多種螢光顏色的 Zombie Dye 水溶性螢光染料, 可用來區分細胞的死活狀態,且在細胞染色後固定,並不影響染色結果,非常適用於多色細胞的染色。

◆建立同型對照抗體 : (Istotype control antibodies) 的染色樣本,BioLegend 螢光抗體頁面,可在產品詳細 (Product details) 說明處,找到其建議的同型對照抗體,可加快您尋找產品的速度。

◆Fc Blocking Controls : 可阻斷對 Fc 受器的抗體,避免螢光抗體與細胞產生非特性結合。BioLegend 提供人類細胞使用的 Human TruStainFcX™ (Fc Receptor Blocking Solution) (cat.no 422301) 以及阻斷小鼠 Fc II/III受體的 TruStainFcX™ PLUS (cat.no 156603) 的阻斷緩衝試劑

查看 BioLegend 流式細胞術控制組介紹

(7) 優化染色條件
BioLegend 螢光抗體都已經提供好建議的螢光抗體染色濃度,客戶只需要照著說明書進行,或者微調就可以找到最佳的染色條件。


查看 BioLegend 流式細胞術故障排除資料網。


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發佈者 發佈時間 Sep 27, 2021 瀏覽次數 198
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