細胞毒性分析 Cytotoxicity assay guide-LDH assay、DRAQ7、PI、死活染劑
通過測量細胞內物質的滲漏或用細胞膜不可滲透的染劑測量細胞膜的破損情況
常見的細胞毒性分析方法有以下幾種:
• 細胞內酵素滲漏檢測 Enzyme leakage assays
• 膜不滲透染劑 Membrane impermeable dyes
• 胺反應性染劑 Amine-reactive dyes
• 活細胞:死細胞雙染色 Dye combination live:dead cell assays
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其他測定細胞毒性的替代方案:
除了上述提供、直接檢測細胞毒性的分析方法外,亦可以透過測定細胞活力 (Cell Viability),例如: 細胞群中的健康細胞數,來間接檢測細胞毒性。了解如何進行細胞活力檢測。
您還可以了解檢測細胞凋亡 (Apoptosis) 的分析方法,例如: Annexin V、TUNEL 和 Caspase 檢測;以及細胞增殖/細胞週期檢測,例如使用BrdU/EdU 和 DNA 染色染劑進行的此類檢測。
其他間接檢測細胞毒性的分析方法還有SRB分析法,它將磺胺多巴酚染劑 (Sulforhodamine B, SRB) 的結合水準作為活細胞數的衡量指標。另有結晶紫檢測 (Crystal violet assay),其工作原理與SRB染劑相似。
細胞內酵素滲漏檢測
測定細胞膜出現損傷時,漏出到細胞外的酶活性。以乳酸脫氫酶(LDH)檢測最為普遍。
LDH assay / Lactate dehydrogenase assay ab65393 和 ab197004: LDH 氧化乳酸鹽,生成一種有色產物或螢光(Ex/Em 535/587 nm)產物。
AK assay /Adenylate kinase assay ab228557: AK 可將 ADP 轉換為 ATP,並產生冷光。AK 的活性沒有 LDH 持久。
膜不滲透染劑
細胞活性檢測通常使用不可穿透膜的螢光染料(最常見的是 DNA 染劑),通過受損細胞膜對細胞進行染色。由於 Propidium iodide (PI) 發射光譜寬且傾向於與活細胞結合,因此在細胞活性檢測中,大部分 PI 被 DRAQ7™ 和 7-AAD 取代。
DRAQ7™ ab109202: Ex/Em 633 & 647/665–800 nm. DNA 染劑
7-AAD ab228563: Ex/Em 488/647 nm. DNA 染劑
Propidium Iodide ab14083: Ex/Em 536/617 nm. DNA 染劑 .隨著時間推移由細胞滲出。
胺反應性染劑
胺反應性染料可以與細胞表面與細胞內的胺類結合,活細胞只有細胞表面被染色呈現較弱螢光,細胞膜破損的死細胞,細胞內被染色呈現較強螢光。通過螢光強度強弱來區分死細胞和活細胞。
ab176738: Ex/Em 410/450 nm. (Fluorometric - Blue)
ab176739: Ex/Em 408/512 nm (Fluorometric - Green)
ab176740: Ex/Em 398/550 nm (Fluorometric - Orange)
ab176741: Ex/Em 353/442 nm (Fluorometric - Blue)
ab176742: Ex/Em 498/521 nm (Fluorometric - Green)
ab176743: Ex/Em 547/573 nm (Fluorometric - Orange)
ab176744: Ex/Em 583/603 nm (Fluorometric - Red)
ab176745: Ex/Em 649/660 nm (Fluorometric - Deep Red)
活細胞:死細胞雙染色
活細胞:死細胞檢測可搭配使用多種染料。例如廣受歡迎的live and dead cell assay ab115347使用溴化乙錠二聚體 (ethidium homodimer) 標記死細胞,使用酯酶裂解染劑標記活細胞。或者, cell viability assay kit (fluorometric – dual green/red) ab112121,使用紅色 DNA 染色染劑對死細胞染色,使用綠色酯酶裂解染劑對活細胞染色。
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