BioLegend - Optimized Multicolor Flow Cytometry Panels
BioLegend - Optimized Multicolor Flow Cytometry Panels
全光譜流式細胞螢光抗體的多色搭配
在免疫學及相關學科領域的研究中，多參數流式不僅能夠分析細胞的各種理化特性，例如細胞表型檢測、細胞內外因子檢測、周期、凋亡和增殖檢測等，還可以進行細胞分選。因此，基礎學科和臨床診斷領域都將流式技術視為不可或缺的技術之一。傳統流式技術由於流式細胞儀配置的檢測通道數量有限，因此限制了可以同時檢測的指標數量。如果要進行更深入的數據挖掘，通常需要更大的工作量。隨著科研工作者對課題研究的深入以及成本考量，希望在同一份樣本中同時檢測更多指標的需求增加，流式技術也相應發展。更高通量的全光譜流式細胞儀和質譜流式細胞儀也逐步進入人們的視野。BioLegend作為全球公認的流式領域領導者，我們開發了一系列新的螢光素，包括開創性的遠紅外螢光素APC/Fire™ 810和PE/Fire™ 810，針對黃/綠561 nm激光推出的Spark YG™系列螢光素，以及紫外激光通道下的螢光補充等，以滿足研究人員利用流式技術同時檢測更多指標的需求。目前，我們銷售的螢光素數量已超過40個。
然而，構建一個成功的多色流式 panel 並不像想象中的那麼簡單。通常需要進行更多的優化工作，包括螢光素/指標的選擇、抗體滴定和緩衝液的選擇等。在日常工作中，我們收到了許多希望 BioLegend 提供超多色 panel 供參考的諮詢，因此我們一直在積累和優化相關數據。
BioLegend 科學家有測試找出最佳的抗體配色組合清單、優化並上線了 3個多色流式 panel 及相應的操作方案，這有助於幫助大家消除在配色和實驗設計中的一些疑惑，能夠更快地獲得新的發現，應用在全光譜流式的分析上！
這3個多色流式 panel 使用的全光譜流式儀為 5-laser Cytek® Aurora (UV, V, B, YG, R)。
BioLegend 全光譜抗體搭配
Human General Phenotyping (26 colos)
用於檢測人體外周血中主要免疫細胞亞群的 26色抗體組合
| 品名 | 型號 |
| Brilliant Violet 421™ anti-human CD197 (CCR7) | 353207 |
| Pacific Blue™ anti-human CD20 | 302319 |
| Brilliant Violet 510™ anti-human IgM | 314521 |
| Brilliant Violet 570™ anti-human CD3 | 300435 |
| Brilliant Violet 605™ anti-human CD16 | 302039 |
| Brilliant Violet 650™ anti-human CD28 | 302945 |
| Brilliant Violet 711™ anti-human CD38 | 303527 |
| Brilliant Violet 750™ anti-human CD56 (NCAM) | 362555 |
| Brilliant Violet 785™ anti-human CD279 (PD-1) | 329929 |
| Alexa Fluor® 488 anti-human CD45RA | 304114 |
| Spark Blue™ 550 anti-human CD14 | 367147 |
| Spark Blue™ 574 anti-human CD4 | 344679 |
| PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD8 | 344709 |
| PE anti-human TCR γ/δ | 331209 |
| Spark YG™ 581 anti-human IgD | 307805 |
| PE/Dazzle™ 594 anti-human CD141 | 344119 |
| PE/Fire™ 700 anti-human CD25 | 356145 |
| PE/Cyanine7 anti-human CD11c | 301607 |
| PE/Fire™ 810 anti-human HLA-DR | 307683 |
| APC anti-human CD127 (IL-7Rα) | 351315 |
| Alexa Fluor® 647 anti-human CD1c | 331510 |
| Spark NIR™ 685 anti-human CD19 | 302269 |
| Alexa Fluor® 700 anti-human CD123 | 306039 |
| Zombie NIR™ Fixable Viability Kit | 423105 |
| APC/Fire™ 750 anti-human CD45 | 368517 |
| APC/Fire™ 810 anti-human CD27 | 302863 |
BioLegend 昶安
使用 Human General Phenotyping (26 colos) 分析代表數據如下：
BioLegend 螢光抗體全光譜流式細胞儀配色
BioLegend 台灣獨家代理
Fig.1 Human General Phenotyping (26c) 染色結果。 樣本為健康供體人 PBMC，使用 Human General Phenotyping (26c) 染色。採用製造商推薦的標準儀器設置，在 5-laser (UV/V/B/YG/R) Cytek® Aurora 上收集樣品。
備註：由於多種因素，包括但不限於儀器狀態和設置、使用的其他輔助試劑、樣本差異和使用者操作等因素，使用者的實驗結果可能與我們分享的代表性數據有所不同。
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在免疫系統的眾多細胞中，T 細胞作為最主要抵抗外源物質入侵的免疫細胞之一，也是研究得相對清楚的一種細胞。當病原體進入人體內（或腫瘤細胞）引起的急性感染或疫苗接種後，初始 T 細胞被激活，效應 T 細胞（Teff）和記憶 T 細胞（Tmem）快速消滅外來病原體/腫瘤。而慢性感染和癌症患者，T 細胞受到抗原持續刺激，細胞記憶不能有效地發育分化，T 細胞變得精疲力竭，無論是對抗癌症還是感染，它們都會逐漸失去效力，這種現象被稱為「T細胞耗竭（Tex）」。耗竭 T 細胞在功能上有別於效應 T 細胞和記憶 T 細胞，其特點是效應功能喪失，抑制性受體 (IRS) 表達增高且持續，表觀遺傳和轉錄譜改變，代謝方式改變等。T 細胞耗竭是癌症患者免疫功能障礙的主要因素之一。
BioLegend 昶安
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分析疾病中 T 細胞分化和耗竭，對於了解免疫細胞作用機理，發現治療的靶點和提供針對性的治療方案具有重要意義。BioLegend 推出了第二個流式多色的 panel，以協助大家進行 T 細胞分化和耗竭的研究：
BioLegend 昶安
T細胞的細胞分化與耗竭 Panel - Human T Cell Differentiation and Exhaustion (27colos)
用於分析人體外周血中全面功能性表徵各種T細胞亞群的 27色抗體組合
| 品名 | 型號 |
| Brilliant Violet 421™ anti-human CD197 (CCR7) | 353207 |
| Pacific Blue™ anti-human CD28 | 302928 |
| Brilliant Violet 510™ anti-human CD3 | 317331 |
| Brilliant Violet 570™ anti-human CD127 (IL-7Rα) | 351307 |
| Brilliant Violet 605™ anti-human CD152 (CTLA-4) | 369609 |
| Brilliant Violet 650™ anti-human CD366 (Tim-3) | 345027 |
| Brilliant Violet 711™ anti-human CD73 | 344025 |
| Brilliant Violet 750™ anti-human CD185 (CXCR5) | 356941 |
| Brilliant Violet 785™ anti-human CD57 | 393329 |
| FITC anti-human TCR Vα7.2 | 351703 |
| Spark Blue™ 550 anti-human CD8 | 344759 |
| Spark Blue™ 574 anti-human CD45 | 368557 |
| PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD244 (2B4) | 329515 |
| PE anti-human CD279 (PD-1) | 379209 |
| Spark YG™ 581 anti-human CD4 | 344669 |
| PE/Dazzle™ 594 anti-human CD95 (Fas) | 305633 |
| PE/Fire™ 640 anti-human TIGIT (VSTM3) | 372743 |
| PE/Cyanine5 anti-human CD25 | 356155 |
| PE/Fire™ 700 anti-human TCR γ/δ | 331237 |
| PE/Cyanine7 anti-human CD39 | 328211 |
| PE/Fire™ 810 anti-human KLRG1 (MAFA) | 367733 |
| APC anti-human CD223 (LAG-3) | 369211 |
| Spark NIR™ 685 anti-human CD45RA | 304167 |
| Alexa Fluor® 700 anti-human CD19 | 302225 |
| Alexa Fluor® 700 anti-human CD14 | 367113 |
| APC/Fire™ 750 anti-human CD27 | 302845 |
| APC/Fire™ 810 anti-human HLA-DR | 307673 |
BioLegend 昶安
使用 Human T Cell Differentiation and Exhaustion (27c) 分析代表數據如下：
BioLegend 螢光抗體全光譜流式細胞儀配色
Fig.2 Human T Cell Differentiation and Exhaustion (27colos) 染色結果。 樣本為健康供體人 PBMC，使用 Human General Phenotyping (26c) 染色。採用製造商推薦的標準儀器設置，在 5-laser (UV/V/B/YG/R) Cytek® Aurora 上收集樣品。
備註：由於多種因素，包括但不限於儀器狀態和設置、使用的其他輔助試劑、樣本差異和使用者操作等因素，使用者的實驗結果可能與我們分享的代表性數據有所不同。
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為了在另一個維度更詳盡了解T細胞的各個分化亞群，我們組建了一個可重複使用的 27 色流式多色 panel——Human T cell Differentiation and CCRs (27c)，對人外周血單個核細胞中的 CD4 和 CD8 T細胞進行更詳細的表徵。除了通過使用 CD45RA、CCR7、CD27、CD28 分析 CD8+ T細胞的活化，CD161、TCRva7.2、TCRgd解析MAIT和γδT細胞外，同時該 panel 對 CD4+ T 細胞亞群的分析，不再是通過檢測傳統的細胞內因子分泌，而是通過趨化因子受體對主要CD4 T輔助細胞亞群進行了分類。例如，利用趨化因子受體 CCR4、CXCR3、CCR10 和 CCR6，區分出 Th1、Th2、Th17、Th9、Th22、Tfh、Treg 等。這個 panel 的簡便性，更有利於流式檢測在一些疾病，如傳染病、癌症或自身免疫背景下，更簡便詳細地監測 CD4 和 CD8 T 細胞狀態。
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Human T Cell Differentiation and CCRs (27c)
用於表面蛋白的檢測，進行人T細胞的分化和亞群分析
| 品名 | 型號 |
| Brilliant Violet 421™ anti-human CD197 (CCR7) | 353207 |
| Pacific Blue™ anti-human CD28 | 302928 |
| Brilliant Violet 510™ anti-human CD3 | 317331 |
| Brilliant Violet 570™ anti-human CD127 (IL-7Rα) | 351307 |
| Brilliant Violet 605™ anti-human CD183 (CXCR3) | 353727 |
| Brilliant Violet 650™ anti-human CD196 (CCR6) | 353425 |
| Brilliant Violet 711™ anti-human/mouse/rat CD278 (ICOS) | 313547 |
| Brilliant Violet 750™ anti-human CD185 (CXCR5) | 356941 |
| Brilliant Violet 785™ anti-human CD161 | 339930 |
| FITC anti-human TCR Vα7.2 | 351703 |
| Spark Blue™ 550 anti-human CD8 | 344759 |
| Spark Blue™ 574 anti-human CD45 Antibody | 368557 |
| PerCP/Cyanine5.5 anti-human CD195 (CCR5) | 359111 |
| PE anti-human CD279 (PD-1) | 379209 |
| Spark YG™ 581 anti-human CD4 | 344669 |
| PE/Dazzle™ 594 anti-human CD95 (Fas) | 305633 |
| PE/Fire™ 640 anti-human CD38 | 397217 |
| PE/Cyanine5 anti-human CD25 | 356155 |
| PE/Fire™ 700 anti-human TCR γ/δ Antibody | 331237 |
| PE/Cyanine7 anti-human CD39 | 328211 |
| PE/Fire™ 810 anti-human CD194 (CCR4) Antibody | 359433 |
| APC anti-human CCR10 | 341505 |
| Spark NIR™ 685 anti-human CD45RA | 304167 |
| Alexa Fluor® 700 anti-human CD19 | 302225 |
| Alexa Fluor® 700 anti-human CD14 | 367113 |
| APC/Fire™ 750 anti-human CD27 | 302845 |
| APC/Fire™ 810 anti-human HLA-DR | 307673 |
| Human TruStain FcX™ (Fc Receptor Blocking Solution) | 422301 |
BioLegend 螢光抗體全光譜流式細胞儀配色
Human T cell Differentiation and CCRs (27c) 染色代表數據：
BioLegend 螢光抗體全光譜流式細胞儀配色
Fig.3 Human T Cell Differentiation and CCR (27colos) 染色結果。 樣本為健康供體人 PBMC，使用 Human General Phenotyping (26c) 染色。採用製造商推薦的標準儀器設置，在 5-laser (UV/V/B/YG/R) Cytek® Aurora 上收集樣品。
備註：由於多種因素，包括但不限於儀器狀態和設置、使用的其他輔助試劑、樣本差異和使用者操作等因素，使用者的實驗結果可能與我們分享的代表性數據有所不同。
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對於成功來說，使用與所選 panel 兼容的流式細胞儀是非常重要的。敬請關注昶安科技，我們會及時更新 BioLegend 推出更多不同免疫細胞亞群的流式多色 panel 的分享！
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也可以在傳統流式的光譜查看：https://www.biolegend.com/en-us/spectra-analyzer
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