ELISA Troubleshooting 常見問題集
ELISA 類型：
Direct ELISA
抗原被固定在多孔盤表面，並使用特定於抗原的抗體進行偵測，
該抗體直接連接到 HRP 或其他偵測分子。
Indirect ELISA
類似於直接 ELISA 分析，抗原被固定在多孔盤表面。
然而，檢測需要進行兩個步驟，一個特定於抗原的一級抗體與目標結合，
而對應一級抗體主宿主物種的標記二級抗體與一級抗體結合以進行檢測。
Sandwich ELISA
三明治 ELISA 是最常見的形式，需要兩種針對抗原不同表位的抗體。
這兩種抗體通常為匹配的抗體對，其中一種抗體被塗層在多孔盤表面並用作捕獲抗體，
以促進抗原的固定，另一種抗體則與抗原結合進行檢測。
Competitive ELISA
這種測定法也被稱為抑制 ELISA 或競爭型免疫測定法，通過檢測信號干擾來測量抗原的濃度。
樣本抗原與帶有酵素之抗原競爭結合到特定量的標記抗體上，
根據樣本中抗原的量，會有更多或更少的游離抗體可用於結合帶有酵素之抗原，
這意味著樣本中的抗原越多，檢測到的帶有酵素之抗原就越少，信號就越弱，反而亦之。
如何選擇 ELISA KIT ?
仔細評估測定性能力是選擇每組 ELISA 試劑重要的一環，包括靈敏度 (sensitivity)、動態範圍 (dynamic range) 和精確度，其他參數能夠對不同 ELISA 性能有更好的預測性。了解不同的參數的相關參考數值，以幫助您找到適合樣本的ELISA試劑。
數據分析
ELISA standard curve
標準曲線或校準曲線是定量 ELISA 的一個要素，可計算樣本中檢體的濃度。通常以下列幾個曲線模型來製作標準曲線：
- Linear plot: y=a+bx
線性回歸是最簡單的回歸模型，也是最基本的曲線回歸分析方法，然而線性回歸
通常會壓縮到低濃度的點導致濃度低估的情形。
- Semi-log plot: y = a log(x) + b
半對數擬合是將濃度值取對數，然後與對應讀值進行線性回歸。
這種方法常用於當濃度隨著讀值的增加或減少，變化比讀值變化更大的情況下使用。
- Log-log plot: log(y) = a log(x) + b
對於濃度的低至中等範圍提供良好的線性，但較高範圍的部分往往會失去線性。
- 4- or 5-parameter logistic (4PL or 5PL) curves
因考慮了其他參數如最大值 (maximum) 和最小值 (minimum)，需要進行更複雜的計算。
4PL 假設在反曲點 (inflection point) 周圍是對稱的而 5PL 則不考慮，通常對免疫分析更為適用。
通常建議以 4-PL 與 5-PL 來進行數據計算，再來可以選擇以semi-log 或是 log/log 進行作圖
常見問題集
Matrix effect
進行血漿和血清的定量分析有時會出現 (matrix effect) 基質效應。基質效應可包括來自多種基質所組成，如：內源性生物組分之間的相互作用，如磷脂、碳水化合物和內源代謝產物 (膽紅素) 之間的作用；或者帶測物與基質之間的相互作用，如：與血漿蛋白共價結合，種種都可能導致數據的誤判。透過將檢體稀釋 2-5 倍可以減少基質效應，須注意在稀釋檢體時使用與標準曲線相同的稀釋溶液。
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