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免疫反應的煞車系統-調節型T細胞 (regulatory T cell) 免疫反應的煞車系統-調節型T細胞 (regulatory T cell)

免疫反應的煞車系統-調節型T細胞 (regulatory T cell)


免疫反應的煞車系統--調節型T細胞(regulatory T cell)


1995年由 Sakaguchi 研究團隊首次發現體內存在一群高度表現 IL-2 接受器 CD25 的 CD4+ T 細胞，且這群 CD4+CD25+ T 細胞可以抑制因移植CD4+CD25- T 細胞至免疫不全小鼠所導致的自體免疫症狀，故因而命名這群 CD4+CD25+ T 細胞為調節型 T 細胞(regulatory T cell, Treg)。隨著近幾年對於 Treg 的深入研究，我們逐漸了解 Treg 的表型、如何產生、功能、如何穩定細胞及其分子調控等機制。針對Treg與人類各種疾病的關聯性，如 Treg 異常所致的環境或遺傳性自體免疫疾病、如何耗盡 Treg 來增強體內抗腫瘤免疫力、或透過Treg治療免疫性疾病等，在在都顯示了 Treg 相關研究與應用 Treg 在臨床上的重要性1,2。

為此，我們針對 Treg 相關研究，提供研究人員一系列的流式抗體 (下表)，讓您更便於定義與檢測這群細胞。例如以流式細胞儀對Treg進行表型分析時，通常會使用多種標記來識別和定義這些細胞。我們可以利用細胞表面CD25 的陽性表達和 CD127 的陰性表達初步定義這群 Treg 細胞。CD39 和 CD73 為細胞表面核酸外切酶，有助於鑑定 Tregs 的抑制能力。 此外，LAP (TGF-β1) 和 GARP 表現量增加，則可以代表 Treg受到活化且具有功能。

除了利用多色螢光流式抗體鑑別 Treg 細胞族群之外，功能測定和細胞激素分析也可以幫助我們更進一步了解這群 Treg 細胞的功能與特性。

BioLegend Interleukin-2 昶安

指標3 作用說明
CD25 (IL-2RA) A classical Treg marker, CD25 is the alpha chain of the interleukin-2 receptor.
CD39 and CD73 Ectonucleotidases involved in adenosine production and contribute to Treg suppressive function.
CD103 Integrin expressed by intraepithelial lymphocyte T cells and some peripheral Tregs.
CD127 (IL-7RA) Beta chain of the interleukin-7 receptor expressed at low levels by Tregs.
CD134 (OX40) Expressed by activated Tregs. It contributes to Treg stability and function.
CD152 (CTLA-4) Inhibitory receptor involved in immune response suppression.
CD223 (LAG-3) Checkpoint molecule involved in immune response suppression.
CD279 (PD-1) Checkpoint molecule involved in immune response suppression.
CD304 (NRP1/Neuropilin-1) Distinguishes thymic Tregs (tTregs) from peripherally induced Tregs (iTregs).
CD357 (GITR) Constitutively expressed on CD4+ CD25+ Tregs, GITR expression increases on all T cell subsets after activation. It is also found on murine neutrophils and NK cells.
FOXP3 Transcription factor considered the master regulator of Tregs.
Helios Transcription factor expressed in both thymic and peripheral Tregs.
TGF-β Essential for Tregs to differentiate from naïve CD4+ cells and is important in maintaining Treg cell homeostasis.

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使用MojoSort™ Mouse CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit協助您透過簡易快速的步驟純化出 Treg 細胞

圖一、MojoSort™ Mouse CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit有助於純化小鼠Treg細胞。C57BL/6 小鼠脾臟細胞懸浮液以陰性分離方式純化出 CD4+細胞後，以MojoSort™ Mouse CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit陽性選擇純化出 CD25+ 細胞。 左圖：CD4 陰性分離和 CD25 陽性選擇後的細胞。 右圖：未經過任何純化步驟的小鼠脾臟細胞。細胞表面進行CD25-APC染色以Helix NP™ Blue染色排除死細胞干擾。

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使用 Treg-Protector™ 可以提高從動物體內分離 Treg 和 NKT 細胞的回收率

    我們的Treg-Protector™（anti-ARTC2 Nanobody，ART2.2）是一種針對ARTC2 的阻斷奈米抗體，ARTC2 是位在細胞表面的ADP-核糖基轉移酶，研究發現Tregs 和NKT細胞高度表達ARTC2。ARTC2 介導 NAD+ 所誘發的細胞死亡 (NAD+-induced cell death, NICD) 以及 蛋白水解所致的CD27 和 CD62L 脫落。 使用 Treg-Protector™可以阻斷 ARTC2活性，進而改善在細胞分離過程中 Treg 和 NKT的細胞回收率。

    圖二、以Treg-Protector™處理的小鼠，犧牲後取得的脾臟細胞中活Treg細胞頻率較高。在小鼠犧牲前15分鐘，以靜脈注射方式給予 C57BL/6 小鼠 50 µg Treg-Protector™（左）與僅接受 PBS注射 的對照小鼠（右）。 取得小鼠脾臟細胞後，在37°C條件下一小時，再以CD3 Brilliant Violet 605™、CD4 FITC、CD25 PE/Dazzle™ 594和Annexin V Brilliant Violet 421™進行細胞染色。 顯示的流式點狀圖為圈選自CD3+ CD4+ 細胞。用 Treg-Protector 處理的小鼠中活 Treg（CD4+、CD25+ 和膜聯蛋白 V-T 細胞）的出現頻率較高（左）。

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    強而有效的T細胞激活方式

      我們新推出的 Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads，實驗過程中，不需要抗原呈現細胞，只需要將這些已包覆anti-CD3與anti-CD28抗體的磁珠加入培養系統中，即可簡便卻高效能地激活人類 PBMC 或 T 細胞。

      圖三、人類CD3+T細胞經過 Human CD3/CD28 T Cell Activation Beads 刺激五天後之 PD-1 表現。

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      透過添加血清替代物可以取得更大量的 Treg

        對於Treg在臨床應用上的價值明朗化，我們的 Cell-Vive™ GMP 系列產品也同時針對Treg進行測試。人類T細胞在含抗 CD3/CD28 抗體、IL-2 及 TGF-β 的培養條件下，我們的 Cell-Vive™ Chemically Defined Serum Substitute 的性能與人類 AB 血清相當，而 Cell-Vive T-NK Xeno-Free Serum Substitute 則幾乎使 Tregs 的數量增加了一倍。 我們的血清替代品可以提供 Treg 增殖研究明確、可控且安全的替代方案，大幅降低使用人 AB 血清時可能的風險。

        圖四、使用不同血清對人naïve CD4+ T細胞分化Treg的影響。培養系統中含Ultra-LEAF™ anti-human CD3 和 Ultra-LEAF™ anti-human CD28 抗體 (1 µg/mL) 、重組人 IL-2 (200 IU/mL) 及重組人TGF-β (5 ng/mL)，與人naïve CD4+ T細胞共同培養刺激六天後，以ANOVA比較各組Treg生成頻率差異。

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        Foxp3與其流式染色試劑組

          FOXP3 是一種轉錄因子，與常見的 T 細胞表面標記（如 CD4、CD25 及 CD127）相比，FOXP3 被視為是調控Treg的重要分子，也是 Treg 特有的標記。透過將小鼠 CD4+CD25-細胞轉導 FOXP3 表現的研究顯示，轉導 FOXP3 後的 CD4+細胞表現 GITR、CD103 和 CTLA-4 之 T 調節細胞表型4。除此之外，過度表現 FOXP3 會導致小鼠體內免疫功能低下，顯示FOXP3轉錄因子是 T 細胞活性的核心調節分子5。

          與小鼠不太一樣的是，目前研究發現人類表現兩種不同形式的 FOXP3 ：一種是全長序列的 FOXP3；另一種是 FOXP3 delta ，與全長 FOXP3 相比缺少了 exon26。

          我們提供專門進行胞內Foxp3染色與各式應用於胞內轉錄因子染色的試劑組，也有包含檢測人或小鼠 Treg 細胞抗體組合的試劑組，提供研究人員在多色螢光實驗中便利優質的選擇。

          圖五、以True-Nuclear Human Treg Flow™ Kit (FOXP3 Alexa Fluor® 488/CD4 PE/Cyanine5/CD25 PE)分析人類週邊血液淋巴球中Treg族群。

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          參考文獻

          1. Sakaguchi S, Sakaguchi N, Asano M, Itoh M, Toda M. Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alpha-chains (CD25). Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases. J Immunol. 1995 Aug 1;155(3):1151-64.
          2. Tay C, Tanaka A, Sakaguchi S. Tumor-infiltrating regulatory T cells as targets of cancer immunotherapy. Cancer Cell. 2003 Mar 13; 41 (3):450-65.
          3. La Cava, Antonio. “Natural Tregs and autoimmunity.” Frontiers in bioscience (Landmark edition) vol. 14,1 333-43. 1 Jan. 2009, doi:10.2741/3247
          4. Wu, Yongqing et al. “FOXP3 controls regulatory T cell function through cooperation with NFAT.” Cell vol. 126,2 (2006): 375-87. doi:10.1016/j.cell.2006.05.042
          5. Hori, Shohei, and Shimon Sakaguchi. “Foxp3: a critical regulator of the development and function of regulatory T cells.” Microbes and infection vol. 6,8 (2004): 745-51. doi:10.1016/j.micinf.2004.02.020
          6. Allan, Sarah E et al. “The role of 2 FOXP3 isoforms in the generation of human CD4+ Tregs.” The Journal of clinical investigation vol. 115,11 (2005): 3276-84. doi:10.1172/JCI24685
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          發佈者 發佈時間 Apr 23, 2024 瀏覽次數 29
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