死活細胞的全系列 Zombie 染劑
可靈活運用在分辨死活細胞的全系列 Zombie染劑
我們在前篇介紹過在流式配色組合中加入死活細胞指示染劑是得到正確可信賴的流式數據關鍵步驟之一。BioLegend 提供了一系列透過與胺基結合的 Zombie 螢光染劑 (表一)。在活細胞裡，蛋白上的胺基表現在細胞表面上。當細胞死亡的時候，細胞失去膜的完整性，使得 Zombie Dyes能夠接觸到細胞質的蛋白成分。與細胞表面的胺基相比，細胞內部的蛋白量更多，因此死細胞染上的 Zombie Dyes 比活細胞明顯增加 (圖一)。
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表一、BioLegend提供一系列可分辨死活細胞的Zombie螢光染劑
激發雷射 |
Zombie Dye |
Em |
Equivalent Fluor Channel |
UV |
Zombie UVTM |
459 |
DAPI |
Violet |
Zombie VioletTM |
423 |
BV421TM, Pacific Blue |
Zombie AquaTM |
510 |
BV510TM |
|
Zombie YellowTM |
572 |
BV570TM, Pac Orange |
|
Blue |
Zombie GreenTM |
515 |
FITC, AF488® |
Zombie B550TM |
540 |
N/A |
|
Zombie RedTM |
624 |
PE/Texas Red® |
|
Yellow/Green |
Zombie YGTM 581 |
581 |
N/A |
Zombie RedTM |
624 |
PE/Texas Red® |
|
Red |
Zombie R685TM |
685 |
N/A |
Zombie R718TM |
711 |
N/A |
|
Zombie NIRTM |
746 |
APC/Cy7 |
注意: 對於某些 Zombie Dyes，由於光譜解析細胞儀的性質，在此未列出相對應的通道。
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圖一、Zombie染劑可與蛋白胺基結合，並對細胞固定步驟耐受性佳的一種死活細胞指示劑。活細胞的細胞膜可以排除染劑進入胞內，因此染劑僅會標記在細胞膜上的蛋白，但死細胞因細胞膜通透性改變，染劑可進入胞內與胞內豐富的蛋白結合，因此與活細胞相較起來，死細胞染上Zombie染劑的程度高出許多。
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PI（Propidium Iodide; 一種非滲透性染料）和 7-AAD（7-amino-actinomycin D; 一種半滲透性染料）是常見的核酸染色劑，應用於流式技術中作為活/死細胞指示劑(圖二)。 然而，這些染劑並不適用於所有實驗。由於核酸染色劑與DNA 結合時會發出螢光，因此它們的染色效果可能會受到有機溶劑的影響，例如常用於細胞固定的甲醇 (MeOH) 或乙醇 (EtOH)。MeOH和 EtOH為偵測胞內細胞激素、核內抗原及偵測訊息傳遞Phospho-flow染色過程中常用的固定劑成分。這些溶劑會使 DNA 變性，導致染色劑與核酸失去親和力而被洗掉 (圖三、四)。
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圖二、DRAZ7TM, PI及7AAD為DNA親和力極佳的染劑。活細胞可排除親核性染劑，死細胞因細胞膜通透性改變，使得這些染劑可進入細胞核內與DNA結合。這些染劑在適當的雷射激發下可發出高強度的螢光訊號。
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圖三、MeOH/EtOH固定造成7-AAD與核酸結合減少與訊號損失。左圖為未經固定的脾臟細胞。右圖為相同的細胞以70% EtOH固定。
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圖四、在使用 PI 的情況下，有機溶劑除了導致死細胞DNA上的核酸染色劑脫落之外，溶劑還會透化先前的活細胞。這導致PI非常快速地標記在EtOH/MeOH固定之前已存活的新透化細胞，導致「背景」發生很大的變化，從而失去活細胞和死細胞的分辨率。左圖為未經固定的脾臟細胞，右圖為相同的細胞以EtOH 固定。
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Zombie Dye 與胺基發生共價反應，這是與細胞蛋白質的不可逆的結合。MeOH 和 EtOH 固定不會影響 Zombie Dye，因此即使細胞經過Zombie Dye染色後仍能耐受固定步驟 (圖五)，維持穩定的實驗結果。BioLegend 推出 Zombie 系列產品，這些 Zombie Dyes 分別可透過紫外線、紫光、藍光、黃/綠光及紅光雷射激發，方便您靈活運用於各種流式染色組合中。
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圖五、一日齡的C57BL/6小鼠脾臟細胞依照標準操作步驟，以 Zombie Dyes進行染色，並在固定前（藍色/紫色）或固定透化後（紅色）進行分析。黑色代表未加入Zombie Dyes的細胞。
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產品資訊：
| 品名 | 規格 | 貨號 |
| Zombie UV™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423107 423108 |
| Zombie Aqua™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423101 423102 |
| Zombie Violet™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423113 423114 |
| Zombie Yellow™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423103 423104 |
| Zombie Green™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423111 423112 |
| Zombie B550™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423121 423122 |
| Zombie YG581™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423123 423124 |
| Zombie Red™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423109 423110 |
| Zombie R685™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423119 423120 |
| Zombie R718™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423115 423116 |
| Zombie NIR™ Fixable Viability Kit | 100 tests 500 tests |
423105 423106 |
BioLegend Interleukin 2 介白素2蛋白 GMP IL-2 昶安科技
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