流式應用的高品質對照---- Veri-Cells™
June 2023 BioLegend x 昶安專欄
流式應用的高品質對照---- Veri-Cells™
代檢實驗室、臨床研究機構、多中心臨床試驗，皆需要穩定的細胞作為不同批次穩定性與儀器每日監測的對照。為此，我們開發了凍乾週邊血液單核球(Lyo-PBMC)產品。它可以用來檢測多種表面標記，包括CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD20、CD21、CD22、CD25、CD27、CD56、CD69、CD154、CD360及IL-21R等。除此之外，Lyo-PBMC也可以用於檢測胞內細胞激素如IL-2、IFNγ、TNFα，也可以用來偵測轉錄因子如FoxP3等表現量。回溶細胞凍乾粉後，Lyo-PBMC和新鮮取得的PBMC有相似的FSC/SSC細胞型態，並穩定表達前述的細胞表面標記。我們持續研究Lyo-PBMC產品在儲存六個月以上的穩定性。
前言
流式實驗需要包括螢光抗體和緩衝液等各種試劑，且病人的檢體樣本可能表達或不表達某些標記物，因此，確認每日配置的多色混合物可以用來檢測所有指標是非常重要的。代檢實驗室與臨床實驗室每日都需要確認所有試劑能達到穩定一致的效能，為了達到這個目的，實驗操作就需要細胞對照組和所有檢體同時併行。目前市場上已有許多細胞對照產品，但大部分都受限於其穩定性，一般而言，未開封產品可保存數個月，開封後只能存放幾天。BioLegend Veri-Cells™有更穩定的效能，未開封至少可保存一年，回溶後可存放五天。本文我們將討論Veri-Cells™ PBMC，Veri-Cells™ Leukocytes和Veri-Cells™ Activated PBMC
三種細胞凍乾產品。這些回溶的細胞與新鮮製備的PBMC或破除紅血球的全血細胞之散射光參數相似。穩定表達一些常見的細胞表面標記，如CD3、CD4、CD8、CD16、CD19、CD20、CD21及CD56等。除此之外，我們也可以偵測回溶細胞內的IL-2、IFN-γ及TNFα等細胞激素與核內的Foxp3與Helios等轉錄因子表現。與目前市面上供應的對照細胞樣本比較，BioLegend Veri-Cells™最重要的改善螢光背景值，更接近正常人樣本的上機狀態。同時我們也提供特定分析項目或大包裝等客戶訂製需求服務。
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研究方法
對照細胞凍乾粉以隨試劑組搭配的緩衝液回溶。各抗體以最佳建議濃度進行染色，染色後以細胞等張液清洗兩次，以BD™或Beckman Coulter™ 流式細胞儀進行分析。
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結果
圖一、細胞對照凍乾粉在回溶後仍保有淋巴球、單核球、多核球的型態。
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圖二、Veri-Cells™ PBMC與Leukocytes凍乾粉回溶後之細胞表面標記表現。Veri-Cells™ PBMC與Leukocytes凍乾粉回溶後，以CD4 PE/Cy7、CD8 APC、CD19 PerCP/Cy5.5及CD56 FITC抗體進行染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。
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圖三、回溶後的Veri-Cells™ PBMC可偵測到趨化因子接受器表現。Veri-Cells™ PBMC與Leukocytes凍乾粉回溶後，以CD4 PE/Cy7、CD19 PerCP/Cy5.5、CXCR5 PE/Dazzle™ 594及CCR6 Brilliant Violet 421™抗體進行染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。
圖四、回溶後的Veri-Cells™ PBMC可偵測到轉錄因子Foxp3與Helios表現。Veri-Cells™ PBMC凍乾粉回溶後，以CD4 Brilliant Violet 510™抗體進行染色，固定後以True-Nuclear™ Transcription Factor buffer set增加細胞通透性，接著進行核內Foxp3 PE與Helios PE染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。
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圖五、回溶後的Veri-Cells™ Activated PBMC可偵測細胞表面上的活化指標與胞內細胞激素。Veri-Cells™ Activated PBMC凍乾粉回溶後，以CD3、IL-2、IFN-γ及TNF-α或CD3、CD69、CD25及CD40L (CD154)抗體組合進行細胞染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。
圖六、長期保存的Veri-Cells™ PBMC有極佳的穩定性。Veri-Cells™ PBMC(未開封10個月)凍乾粉回溶後，以CD4 PE/Cy7、CD8 APC、CD19 PerCP/Cy5.5、CD56 FITC及CCR6 Brilliant Violet 421™抗體組合進行細胞染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。經過10個月保存的Veri-Cells™ PBMC和凍乾後立即使用的Veri-Cells™ PBMC中，表現CD4、CD8的T細胞和B細胞的族群比例幾乎一樣。
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圖七、回溶五天後的Veri-Cells™ PBMC仍保有相似的細胞狀態。Veri-Cells™ Activated PBMC凍乾粉回溶後當天或回溶五天後，分別以CD4 PE/Cy7、CD8 APC、CD19 PerCP/Cy5.5、CD56 FITC及CCR6 Brilliant Violet 421™進行染色。所有圖示皆圈選自淋巴球族群。
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